Какова диагностика хеликобактериоза?

Диагностика хеликобактериоза основана на определении наличия и количества бактерий Helicobacter Pylori на слизистой оболочке желудка. Для этого применяются две группы методов – инвазивные и неинвазивные. Инвазивные методы требуют проникновения внутрь желудка эндоскопической аппаратуры, забора биопсии (кусочек слизистой желудка) и последующего исследования и изучения биоптата. Неинвазивные методы не требуют забора биопсии, а для исследования необходима кровь, кал или выдыхаемый воздух. Инвазивные и неинвазивные методы диагностики хеликобактериоза отражены в таблице:

Инвазивные методы	Неинвазивные методы
Бактериологическое исследование	Серологическое исследование
Гистология	Полимеразная цепная реакция
Быстрый уреазный тест	Уреазный дыхательный тест
Полимеразная цепная реакция
Фазово-контрастная микроскопия

Для проведения инвазивной диагностики хеликобактериоза необходима эндоскопическая манипуляция с забором биопсии.

Инвазивные методы диагностики хеликобактериоза

Бактериологический метод представляет собой посев на питательные среды материала, находящегося на кусочке слизистой желудка, взятой в виде биопсии. При этом на среде вырастают колонии микроорганизмов, которые имеются в желудке. Поэтому, при наличии Helicobacter Pylori в желудке, на питательной среде вырастет соответствующая колония, что является 100%-м результатом хеликобактериоза. Бактериологический метод является высокоспецифическим, а потому при его использовании исключены ложноположительные и ложноотрицательные результаты. Помимо этого, бактериологический метод позволяет выявить чувствительность к антибиотикам и составить схему эрадикации, которая будет максимально эффективной.

Результат бактериологического исследования будет готов только через 3 – 5 дней после взятия материала, поскольку именно столько времени необходимо, чтобы на питательных средах выросли колонии микроорганизмов. Данный анализ проводится не в каждой лаборатории.

Эндоскопия пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки (ФГС, ФГЭДС) применяется очень часто для диагностики хеликобактериоза. Однако данный метод позволяет оценить наличие или отсутствие Helicobacter Pylori только косвенно, по морфологическим признакам, имеющимся на слизистой оболочке органов. Так, признаками хеликобактериоза являются следующие изменения слизистой желудка:

• Язвы;


• Выбухания на слизистой оболочке разного размера;


• Покраснение слизистой оболочки;


• Мутная слизь в желудке;


• Отек слизистой;


• Уплощение складок слизистой.

Наиболее достоверными признаками хеликобактериоза являются выбухания на слизистой и язвы в области луковицы двенадцатиперстной кишки. Наличие слизи и покраснение слизистой свидетельствуют о большом количестве Helicobacter Pylori.

Фазово-контрастная микроскопия может обнаружить Helicobacter Pylori в нативном биоптате, которые никак не подготовлен и не обработан после взятия в ходе эндоскопии. Микроскопическое исследование можно применять, когда количество Helicobacter Pylori достаточно велико. Результат исследования готов очень быстро, поскольку для его проведения не требуется подготовки материала. Кусочек слизистой кладется на предметное стекло, поверх помещается капля физиологического раствора и закрывается покровным стеклом. Затем врач-лаборант изучает кусочек слизистой под фазово-контрастным микроскопом при 100-кратном увеличении. Helicobacter Pylori при этом видны в виде характерных изогнутых бактерий, беспорядочно движущихся.

Гистологический метод представляет собой "золотой стандарт" в диагностике Helicobacter Pylori. Для гистологической диагностики также необходим биоптат, который затем обрабатывают, как микропрепарат, с проводкой в спиртах восходящей концентрации и заливкой в парафин. Затем полученные препараты окрашивают гематоксилином-эозином, генцианвиолетом, по Романовскому-Гимзе, по Вартину-Старри, по Гомери и по Гента. Готовые и окрашенные микропрепараты врач-гистолог или патоморфолог изучает под световым микроскопом. Helicobacter Pylori в таких препаратах определяется в виде извитых палочек, находящихся на поверхности эпителиальных клеток. В соответствии с Сиднейской классификацией 1990 г., по результатам гистологии выделяют три степени обсемененности Helicobacter Pylori:

• Низкая (+) – в поле зрения не более 20 микробов;


• Средняя (++) – в поле зрения не более 50 микробов;


• Высокая (+++) – в поле зрения более 50 микробов.

Иммуногистохимия представляет собой высокоточный метод диагностики Helicobacter Pylori. Для его проведения необходимы биоптаты, подготовленные как микропрепараты, но неокрашенные. Данные кусочки слизистой желудка обрабатывают антителами к Helicobacter Pylori, то есть, по сути, проводят иммуноферментный анализ (ИФА) прямо на предметном стекле. В результате, при наличии Helicobacter Pylori, они реагируют с антителами, образуя комплексы. Затем препарат окрашивают специальными красителями, которые реагируют только с комплексами H.Pylori-антитело.

Уреазный тест является специфичным и чувствительным. Для его проведения необходим биоптат, взятый в ходе эндоскопии. Суть метода заключается в следующем – уреаза, вырабатываемая Helicobacter Pylori, быстро разлагает мочевину на аммиак и углекислый газ, что вызывает изменение кислотности среды в щелочную сторону. Именно это изменение кислотности и можно зафиксировать при помощи индикаторов. Для проведения теста берут кусочек слизистой, полученный в ходе эндоскопии, и помещают его в раствор мочевины с добавленным в него индикатором. При наличии Helicobacter Pylori мочевина раствора разлагается, и кислотность сдвигается в щелочную сторону. Изменение кислотности приводит к тому, что индикатор изменяет окраску, и весь раствор становится не ярко-желтым, а красно-малиновым.

Поскольку скорость изменения окраски в ходе уреазного теста зависит от количества Helicobacter Pylori, за результатом исследования наблюдают в течение суток. Время развития малиновой окраски свидетельствует о количестве Helicobacter Pylori:

• Окраска появляется к концу суток от начала теста – незначительное количество (+);


• Окраска появляется в течение 2 часов – умеренное количество (++);


• Окраска появляется в течение первого часа – значительное количество (+++).

Полимеразная цепная реакция может проводиться на биоптате. В этом случае точность и специфичность анализа будет очень высокой. При помощи ПЦР можно выявить даже единичные микробы.

Цитология применяется для диагностики Helicobacter Pylori только в России. Суть данного метода состоит в следующем – биопсия используется для приготовления отпечатка, который окрашивается по Романовскому-Гимзе. В данном мазке ищут спиралевидные Helicobacter Pylori. Цитология является методом с очень низкой чувствительностью – всего 20%, поэтому часты ложноотрицательные результаты.

Неинвазивные методы диагностики

Уреазный дыхательный тест получил широкое распространение в последние годы, поскольку прост в исполнении, точен и специфичен. Тест основан на том, что уреаза, выделяемая Helicobacter Pylori, может разлагать мочевину на углекислый газ и аммиак. Углекислый газ с током крови транспортируется в легкие и удаляется с выдыхаемым воздухом. Для дыхательного теста в молекуле мочевины требуется меченый углерод С₁₃ или С₁₄. Чаще всего применяется С₁₃, поскольку при этом необходимо менее сложное и дорогостоящее оборудование.

Для уреазного теста берут две фоновые пробы выдыхаемого воздуха, а затем дают человеку завтрак и мочевину с меченым углеродом С₁₃, а затем в течение часа через каждые 15 минут берут пробу выдыхаемого воздуха. Таким образом, получается 2 фоновые пробы и 4 тестовые. Воздух всех проб подвергают масс-спектрометрии, и определяют увеличение концентрации в воздухе С₁₃ в тестовых образцах относительно фоновых. При увеличении концентрации С₁₃ в выдыхаемом воздухе на 5 промилле тест считается положительным, то есть у человека имеется хеликобактериоз.

Иммунологические методы (ИФА) позволяют определять Helicobacter Pylori в крови, слюне и желудочном соке. При этом определяются антитела к Helicobacter Pylori, которые продуцирует иммунная система для уничтожения патогенного микроорганизма. Однако ИФА хорошо подходит только для первичной диагностики нелеченого хеликобактериоза, поскольку даже после успешной элиминации микробов из желудка результаты этого теста остаются положительными еще в течение нескольких лет, пока не погибнут клетки памяти иммунной системы. Также ИФА не пригоден для диагностики хеликобактериоза у детей, поскольку их иммунная система дает слабый ответ на инфекцию и вырабатывает малое количество антител. Для проведения ИФА можно брать кровь, слюну, кал и желудочный сок.

Полимеразная цепная реакция может применяться для обнаружения Helicobacter Pylori в каловых массах. Однако на сегодняшний день этот метод используется не слишком широко.